Skip to content

Autoprzeciwciała przeciwko GPIHBP1 jako przyczyna hipertriglicerydemii ad

1 miesiąc ago

512 words

Postawiliśmy hipotezę, że takie interferencje na ELISA mogą być spowodowane przez autoprzeciwciała GPIHBP1. Następnie postawiliśmy hipotezę, że te autoprzeciwciała zapobiegną wiązaniu lipazy lipoproteinowej z GPIHBP1 (tj. Zespołem autoprzeciwciał GPIHBP1), a tym samym powodują chylomikronemię. W tym badaniu zgłaszamy obecność specyficznych autoprzeciwciał GPIHBP1 o wysokim mianie u sześciu pacjentów z chylomikronemią i wykazujemy, że przeciwciała te blokują wiązanie lipazy lipoproteinowej z GPIHBP1. Metody
Badaj pacjentów
Początkowa kohorta badawcza, która została wybrana do pomocy w opracowaniu analizy ELISA dla GPIHBP1, obejmowała 23 pacjentów, u których stwierdzono mutacje w GPIHBP1 lub LPL (gen kodujący lipazę lipoproteinową), 8 pacjentów z hipertriglicerydemią bez mutacji w GPIHBP1 lub LPL i 9 kontroli. Po zidentyfikowaniu 2 pacjentów, którzy mieli autoprzeciwciała GPIHBP1 (1 z układowym toczniem rumieniowatym [SLE] i obydwoma z hipertriglicerydemią) w tej początkowej kohorcie 40 pacjentów, następnie przesiewaliśmy kolejnych 162 pacjentów pod kątem obecności takich autoprzeciwciał. Grupa ta obejmowała 40 pacjentów ze SLE z kliniki reumatologicznej na Uniwersytecie Kalifornijskim w Los Angeles (z których połowa była poddawana terapii immunosupresyjnej) oraz 122 pacjentów z kliniki lipidowej (wszystkie z hipertriglicerydemią o nieznanej przyczynie).
202 próbki osocza od badanych pacjentów były albo zarchiwizowanymi okazami, które uzyskano na podstawie aprobaty instytucjonalnej, albo próbkami bez identyfikatorów, które zostały wysłane od innych badaczy do ostatniego autora. W związku z tym uniwersytetowa komisja etyczna uznała, że wykorzystanie tych próbek zostało zwolnione z zatwierdzenia przez komisje przeglądowe instytucji. Liczby używane do identyfikacji pacjentów w tym raporcie to numery próbek zarejestrowane w celu identyfikacji próbek przez laboratorium ostatniego autora.
Analizy ELISA
Aby zmierzyć poziomy GPIHBP1 w próbkach osocza otrzymanych od badanych pacjentów, użyliśmy testu ELISA typu sandwich opartego na przeciwciałach monoklonalnych, który jest podobny do tych stosowanych do pomiaru lipazy lipoproteinowej i poziomów apolipoproteiny B.11,12 W tych analizach płytki ELISA o 96 studzienkach były powlekane specyficznym dla GPIHBP1 przeciwciałem monoklonalnym RF4.10 Po dodaniu próbek osocza lub znanych ilości rekombinowanego ludzkiego GPIHBP1, wykrywano związany GPIHBP1 z znakowanym peroksydazą chrzanową (HRP) specyficznym dla GPIHBP1 przeciwciałem monoklonalnym RE3.10
W celu wykrycia autoprzeciwciał GPIHBP1 w osoczu, 96-studzienkowe płytki opłaszczono ludzkim GPIHBP1 lub GPIHBP1 zawierającym znacznik receptora aktywatora plazminogenu typu amininowego typu urokinazy. 8 Po zablokowaniu albuminą surowicy bydlęcej dodano próbki osocza. Po przemyciu płytek, wiązanie przeciwciała z GPIHBP1 wykrywano kozimi przeciwciałami IgG i IgM znakowanymi HRP. Określiliśmy ilość autoprzeciwciał GPIHBP1 (w arbitralnych jednostkach), porównując sygnały ELISA z sygnałami w równoległym teście ELISA, w którym płytki powlekano znanymi ilościami ludzkiej IgG. Przeprowadziliśmy także analizy ELISA w celu przetestowania autoprzeciwciał przeciwko trzem innym białkom Ly6 (CD177, C4.4A i CD59), które były dostępne do testów w naszym laboratorium.
Aby przetestować zdolność autoprzeciwciał GPIHBP1 do blokowania wiązania lipazy lipoproteinowej z GPIHBP1, 96-studzienkowe płytki pokryte GPIHBP1 inkubowano z rozcieńczeniami próbek osocza przez noc w 4 ° C.
[hasła pokrewne: neuropatia nerwu wzrokowego, sztućce gerlach allegro, list pożegnalny do alkoholu ]

0 thoughts on “Autoprzeciwciała przeciwko GPIHBP1 jako przyczyna hipertriglicerydemii ad”

Powiązane tematy z artykułem: list pożegnalny do alkoholu neuropatia nerwu wzrokowego sztućce gerlach allegro